小鼠肺微血管内皮细胞形成了一种半选择性屏障，这一屏障在肺部气体交换及调节液体与可溶物在血液与肺间质之间的流动中起着至关重要的作用。此外，这些细胞还具备代谢功能，可以执行一定的非呼吸职能。在肺损伤的情况下，肺微血管内皮细胞是活性氧类的重要靶细胞之一。在肺炎的发生过程中，神经体液介质和氧化剂的作用使得内皮细胞的细胞间隙渗透性增加，从而促使蛋白质从血液进入间质。这种渗透性的增加会导致低氧血症，进而引发成人呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿。小鼠的肺微血管内皮细胞来源于健康的实验动物肺组织，细胞表现为上皮样多角形，且在贴壁培养中经CD31免疫荧光染色确认阳性，其纯度超过90%，且不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母及真菌。

为了进行实验，以下是所需的仪器设备与试剂：

1. 仪器

• 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
• CO2细胞培养箱 BC-J160S
• 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
• 高速冷冻离心机 Multifuge X1R
• 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽 DK-2B

2. 试剂耗材

• T25细胞培养瓶 430639
• 血球计数板 Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片 YA0350
• 细胞培养孔板 WHB-24
• 胎牛血清 1414426
• 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
• 25%胰蛋白酶（含0.02% EDTA） 1734858

3. 小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5-10天龄的乳鼠浸泡在75%乙醇中，随后移入生物安全柜；

2) 解剖乳鼠，从胸部取出双肺，并尽量去除结缔组织；

3) 取肺的边缘部分，剪碎，并将组织块放入T25培养瓶中，倒置放在细胞培养箱内；

4) 2小时后，向培养瓶中加入2 mL内皮细胞培养基，轻轻将瓶子正置，以确保组织块不浮起；

5) 每3天更换2 mL培养液，当细胞从组织块中爬出后，每2天更换一次培养液，当细胞融合度达到60-70%时，去除组织块，并将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

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