葡萄的品质容易受到低温胁迫的影响，而耐寒的野生山葡萄（Vamurensis）中冷响应基因及其调控机制则是葡萄遗传改良的关键。在冷胁迫响应过程中，WRKY转录因子发挥着重要作用。它通过结合W-box元件调控次生代谢和碳水化合物合成等生理过程。特别是在葡萄中，VaWRKY65能激活β-淀粉酶（VaBAM3），将淀粉分解为可溶性糖，从而调节渗透压，稳定细胞结构，此外，VaWRKY65还可以直接调控过氧化物酶（VaPOD36），清除活性氧（ROS），从而增强植物的耐寒性。然而，VaWRKYs在葡萄耐寒性中的具体功能和机制仍需深入研究。

最近，XPJ相关研究在《Horticulture Research》上发表，发现VaWRKY65在冷胁迫下通过调控碳水化合物代谢和抗氧化机制，提高了葡萄的耐寒性。VaWRKY65激活了VaBAM3，促进可溶性糖的积累，从而调节渗透压；同时也激活了VaPOD36的转录，清除活性氧（ROS），为葡萄提供了双重的耐寒保障。

研究还表明，通过在烟草叶片中瞬时表达由VaBAM3启动子驱动的荧光素酶（LUC）报告基因，检测到VaBAM3启动子的活性在冷处理后显著升高。这一发现凸显了VaBAM3在冷胁迫下的调控机制。结果显示，VaWRKY65通过增强VaBAM3启动子的活性来调控耐寒性，而启动子的突变则抑制了这种增强效果。

进一步的实验揭示了VaWRKY65在冷胁迫下调控ROS的机制。研究发现，VaWRKY65能够结合并激活VaPOD36的表达，上调VaPOD36可增强POD酶活性，提高抗氧化能力，从而减少ROS的积累，提升植物的耐寒性。实验方法简述：将VaPOD36的基因启动子片段与pGreenII-0800-LUC载体融合后转入根瘤农杆菌GV3101，再将其或空载体转入本氏烟草叶片。经过共培养后，进行了低温处理，并通过分析荧光信号来监测转录激活情况。

综上所述，这些研究为我们深入理解葡萄在低温胁迫下的生理机制提供了基础，特别是XPJ在调控耐寒性方面的潜力，未来的研究将进一步推动葡萄的遗传改良和新品种的培育。