宿主细胞DNA的来源及其检测方法

宿主细胞在生物医疗产品的生产中起着关键作用，包括传统疫苗、重组蛋白、抗体药物、细胞治疗、基因治疗和mRNA相关技术等。常用的宿主细胞类型有中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、非洲绿色猴肾细胞（Vero）、人胚肾细胞（HEK293）、大肠杆菌（E. coli）和酵母等。在生产过程中，宿主细胞DNA（Host Cell DNA，HCD）通常在下游纯化阶段通过阴离子交换层析去除。然而，即使经过纯化，残留的HCD仍可能引发免疫原性和安全性问题，因此HCD的检测是生物产品制造中的重要质量控制指标之一。

HCD检测的重要性

宿主细胞残留DNA进入体内后可能导致多种不良后果：

• 致癌性：可能引入致癌基因，促进部分细胞转化为肿瘤细胞，导致细胞异常增殖。
• 感染性：宿主细胞DNA中可能存在病毒基因，通过复制产生感染性病毒粒子。
• 增强免疫源性：宿主细胞基因组中含有丰富的CpG序列，可能引发免疫反应。
• 重组风险：宿主细胞基因组中的LTR序列可能影响临近原癌基因的表达，增加癌变风险。

HCD的检测方法

根据《中国药典》2020年版，通则3407中包括三种外源性DNA残留的检测方法：

1. DNA探针杂交法

通过加热使供试品中的外源DNA变性并吸附于固相膜上，与特异性标记的单链DNA杂交形成双链DNA。检测时与已知阳性对照比较，显色深度反映DNA的量。该方法的特点是化学物质对小于10pg的检测结果影响较大，且不稳定性较高。

2. 荧光染色法

该方法利用双链DNA荧光染料与目标DNA结合，在特定波长激发下产生荧光信号，荧光强度与DNA浓度成正比。其局限性在于信号易受干扰，需要严防DNase污染。

3. 定量PCR法

通过设计特异性引物和荧光标记探针，宿主细胞DNA在热变性后获得单链，通过逆转录和扩增检测DNA的数量。定量PCR法是《中国药典》和新版本USP推荐的标准方法，且由于其高灵敏度和特异性，能够准确检测痕量残留DNA。

产品特点与优势

XPJ全新升级的宿主残留DNA检测产品覆盖了多个细胞类型，包括CHO、E. coli、Vero、HEK293等。试剂盒使用药典中的引物探针序列，无需全面验证，只需方法确认即可。根据定量PCR方法开发的产品，具有LOD达到0003 pg/μL，与其他DNA无交叉反应，从而减少假阳性结果。

XPJ严格的生产管理使批间差控制在CV < 10%。提供快速的手动和自动提取解决方案，确保在2小时内完成检测并保证定量的准确性。所有试剂室温下稳定存放，便于操作。

参考文献

[1] 国家药品监督管理局药品审评中心. 体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行), 2022年05月.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2020年版).

[3] 闫璐瑶, 张家友, 杨晓明. 生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展[J]. 国际生物制品学杂志, 2021, 44(3): 170-174.