XPJ人肺动脉平滑肌HPASMC培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人肺动脉平滑肌（HPASMC）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：SMCM（ScienCell，1101）

传代方法：推荐首次传代比例为1:2，通常每2天更换培养基。备注：收集瓶中培养基以备对比使用；若对比效果不佳，建议直接购买XPJ的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，应尽快培养至良好状态，灌满完全培养液并密封瓶口，确保细胞运输的安全。处理步骤如下：

1. 用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，再放入超净台中进行无菌操作。

2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态。

3. 使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。若未提供照片，默认收到时状态良好。

4. 传代时建议用一瓶原完全培养基，另一瓶使用自行配制的培养基以进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，保留5ml培养基在37℃、5% CO2中培养；若超过80%，则进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若大部分细胞呈圆形并脱落，则迅速终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，然后弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖时，弃去培养液并用PBS清洗一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞收缩后加入5ml完全培养液终止消化。

3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

4. 弃去上清，加入1ml的XPJ无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。

5. 直接将细胞冻存管放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时后再进行。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速置入37℃水浴解冻，至无结晶后消毒管外壁；

2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2条件下培养；

4. 复苏后的第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能因粘附不牢容易脱落，如发现脱落，可以收集所有培养液至离心管，进行重新培养；若需重新消化，添加胰酶并遵循前述消化步骤进行处理。再进行传代分瓶。

五、售后条款

1）可重发的情况及标准

若在运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损等，或者48小时内发现污染问题，需提供真实实验结果以核实重发；准确的细胞状态照片也是重发依据之一。

2）不予重发的情况

如因客户操作不当或非推荐培养体系导致细胞问题，则不提供重发服务；如未提供前三天的细胞照片或在规定时间内未反馈，亦不重发。

在使用XPJ细胞的过程中，我们致力于为您提供高质量的细胞产品和优秀的客户服务。